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找到 作者 包含"李理" 17条结果
  • 高迁移率族蛋白B1 和α平滑肌肌动蛋白在博莱霉素诱导肺纤维化中的表达

    目的 检测高迁移率族蛋白B1( HMGB1) 和α平滑肌肌动蛋白( α-SMA) 在博莱霉素( BLM) 致小鼠肺纤维化模型肺内的表达水平, 探讨HMGB1 在肺纤维化发病机制中的作用。方法 取20 只4 ~6 周龄C57BL/6 雄性小鼠, 随机分为BLM组和生理盐水( NS) 对照组, 每组10 只。分别向气管内灌注BLM( 3 mg /kg) 和NS, 10 d 后处死小鼠。应用RT-PCR 法检测两组肺组织HMGB1 和α-SMA的mRNA 表达水平, 应用免疫组织化学检测两组肺组织中HMGB1 和α-SMA的蛋白表达水平。结果 RT-PCR 半定量和免疫组织化学半定量分析结果显示, BLM组HMGB1 的mRNA 和蛋白表达均较NS 对照组显著增加( 0. 61 ±0. 08 比0. 15 ±0. 02, 13. 12 ±1. 33 比7. 92 ±1. 10, P 均lt;0. 01) ; BLM组α-SMA 的mRNA 和蛋白表达均较NS 对照组显著增加( 0. 89 ±0. 12 比0. 60 ±0. 07,13. 66 ±1. 01 比8. 18 ±1. 33, P 均lt;0. 01) 。结论 在BLM诱导的肺纤维化中肺组织的HMGB1 和α-SMA 表达增加。肺纤维化病理过程可能与HMGB1 表达增加并活化α-SMA 的表达有关

    发表时间:2016-09-14 11:23 导出 下载 收藏 扫码
  • IL-10 对脂多糖诱导Ana-1 细胞的MyD88 /核因子κB 活性影响的研究

    目的 探讨IL-10 对小鼠巨噬细胞髓样分化因子88( MyD88) / 核因子κB( NF-κB) 炎症信号活化的影响。方法 将小鼠巨噬细胞Ana-1 分为脂多糖( LPS) 组和LPS + IL-10 组, 分别于0. 5、1及2 h 收集巨噬细胞和细胞培养上清液,Western blot 检测细胞MyD88 与胞浆、胞核NF-κB p65 亚基表达, ELISA 法检测培养上清中肿瘤坏死因子α( TNF-α) 含量。结果 在0 ~2 h, LPS 组细胞MyD88表达显著持续上升, LPS +IL-10 组于LPS刺激后上升, 0. 5 h 达峰值, 2 h 恢复至正常水平, 1 h 和2 h相对含量均低于LPS 组( 11. 6 ±1. 3 比17. 5 ±0. 7, 8. 8 ±0. 3 比21. 4 ±1. 8, P lt; 0. 05) ; 总NF-κB 表达量在两组间无明显差异。NF-κB 核浆比变化趋势与MyD88 类似, LPS + IL-10 组1 h 及2 h 相对含量亦均低于LPS 组( 1. 1 ±0. 1 比2. 4 ±0. 4,0. 6 ±0. 7 比3. 1 ±0. 6, P lt;0. 05) ; 相应的, LPS+ IL-10 组1 h和2 h TNF-α含量亦低于LPS 组[ ( 222. 5 ±33. 5) pg/mL 比( 365. 2 ±22. 7 ) pg/mL, ( 212. 7 ±15. 9) pg/mL比( 566. 2 ±31. 5) pg/mL, P lt;0. 05] 。结论 IL-10 通过抑制减少MyD88/NF-κB 信号通路活化, 降低TNF-α表达, 从而下调炎症反应强度。

    发表时间:2016-08-30 11:53 导出 下载 收藏 扫码
  • 口服乳酸菌对尘螨致敏小鼠脾细胞MAPK 通路的影响及机制探讨

    目的 比较乳酸乳球菌及植物乳杆菌对尘螨致变应性气道炎症小鼠的免疫调节作用,对其脾细胞MAPK 通路的影响及可能机制。方法 将实验小鼠分对照组( N组) 、尘螨组( 单纯尘螨致敏激发, M组) 、尘螨+ 乳酸乳球菌组及尘螨+ 植物乳杆菌组[ 尘螨致敏激发同时分别用乳酸乳球菌灌胃( L组) , 植物乳杆菌灌胃( P 组) ] , 末次激发后3 d 行肺组织病理学检查, ELISA 法检测脾细胞培养上清IL-10 水平, 流式细胞术检测CD3 + CD4 + 脾细胞分泌IL-4 / IFNγ水平,Western blot 法检测脾细胞中总的及磷酸化P38、ERK 和JNK 蛋白水平。结果 口服乳酸菌明显减轻尘螨致敏激发导致的嗜酸细胞性气道炎症, 以喂服乳酸乳球菌更显著。L 组及M组脾细胞培养上清IL-10 的生成显著增加( P lt;0. 05) , 并以L组更明显, 且其IL-10 的释放率亦明显高于其余三组( P lt;0. 05) ; 流式细胞术显示L组和P组分泌IL-4 的CD4 + 细胞减少的同时, 总CD4 + 细胞比例反而增高, 以L 组为明显。M组与P组磷酸化P38 表达水平较N组显著增高, L 组与N组比较基本无变化, 各组间的磷酸化ERK 及JNK 无明显差异。结论 口服乳酸乳球菌可改善尘螨所致小鼠嗜酸粒细胞性气道炎症, 其免疫调节可能与诱导CD4 + 调节T细胞, 分泌抑制性细胞因子IL-10, 下调P38 MAPK 通路活性, 从而下调Th2炎症相关。

    发表时间:2016-09-13 04:06 导出 下载 收藏 扫码
  • N-乙酰半胱氨酸下调NOX4 表达抑制博莱霉素诱导纤维化小鼠的氧化损伤

    目的 观察活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸( NAC) 对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠的影响, 探讨NAC 抑制肺纤维化的可能机制。方法 将45 只SPF 级雌性昆明小鼠随机分为3 组: 对照组( 气管内雾化生理盐水) 、纤维化组( 气管内博莱霉素3 mg/kg 溶于100 μL 生理盐水内雾化) 、NAC处理组( 气管内雾化博莱霉素后, NAC 400 mg·kg- 1·d- 1溶于100 μL 生理盐水内灌胃) 。处理后第28 d 收集样本。小鼠左肺置于10% 中性甲醛固定, 石蜡包埋切片后行HE 与Masson 染色; 右肺碱水解法检测肺组织羟脯氨酸的含量; 比色法检测血清丙二醛( MDA) 的浓度和总抗氧化能力( T-AOC) ;提取肺组织总蛋白和总RNA, 分别采用Western blot 和RT-PCR 法检测NADPH 氧化酶1( NOX1) 、NOX2 及NOX4 的基因和蛋白表达水平。结果 NAC 处理组小鼠肺组织病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺组织羟脯氨酸含量明显减少( P lt;0. 05) , 血清MDA 浓度较纤维化组显著降低( P gt;0. 05) , 血清T-AOC 较纤维化组升高( P =0. 029) 。纤维化组NOX1/2/4 基因及蛋白表达较对照组显著增强( P lt;0. 05) , NAC 干预后NOX1/2 /4 基因及蛋白表达水平均有所下调, NOX4 蛋白表达明显低于纤维化组( P =0. 001) 。与对照组比较差异无统计学意义( P gt;0. 05) 。结论 NAC 能显著改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化, 其机制与抑制NOX4 蛋白表达、下调氧化应激损伤有关。

    发表时间:2016-09-13 03:50 导出 下载 收藏 扫码
  • 谷胱甘肽硫转移酶M5通过p38MAPK/NF-κB途径下调肿瘤坏死因子α介导的人支气管上皮细胞炎症水平

    目的 探讨急性肺损伤炎症状态下谷胱甘肽硫转移酶M5(GSTM5)对人支气管上皮细胞16HBE炎症水平的影响及其可能的分子机制。 方法 肿瘤坏死因子α(TNF-α;10 ng/mL)诱导16HBE,建立急性肺损伤细胞炎症模型,分组处理如下:空白对照组、TNF-α组(TNF-α)、GSTM5组(GSTM5+TNF-α)、阴性对照组(阴性对照质粒+TNF-α)。GSTM5组及阴性对照组分别采用脂质体Lipofectamine2000转染导入GSTM5-GFP质粒及阴性对照质粒;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10的含量,反转录聚合酶链反应检测NF-κB mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB、P-NF-κB、p38、P-p38蛋白表达水平。 结果 荧光显微镜检查证实成功构建GSTM5-GFP真核表达质粒并转染成功。TNF-α诱导后,细胞培养上清液中IL-6、IL-8、IL-10浓度较空白对照组升高(P<0.05),GSTM5组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10均较TNF-α组降低(P<0.05),差异有统计学意义;同时,TNF-α刺激后各组细胞总NF-κB mRNA转录水平、NF-κB、p38磷酸化水平均较空白对照组增高(P<0.05),而GSTM5组较TNF-α组与阴性对照组降低(P<0.05)。 结论 过表达GSTM5可下调TNF-α诱导的人支气管上皮细胞16HBE炎症水平,其机制与GSTM5抑制p38MAPK、NF-κB磷酸化密切相关。

    发表时间:2016-10-02 04:56 导出 下载 收藏 扫码
  • 应用基因芯片筛选转染FOXO1后A549细胞差异表达基因

    目的 研究转染叉头蛋白O1(FOXO1)后A549细胞基因表达谱的改变,为深入探讨FOXO1在急性肺损伤中的作用机制提供线索。 方法 应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激A549细胞,应用脂质体介导的转染方法将真核表达载体GV230-FOXO1转染入经TNF-α诱导的A549细胞,再提取细胞的总RNA,应用基因芯片技术进行分析。 结果 成功构建并验证了FOXO1真核表达载体,提取了高质量的mRNA进行芯片分析,并通过RNA质量控制(RNA QC)验证。芯片分析结果显示差异表达基因中上调的基因有317个,下调的基因有237个。这些差异表达的基因功能涉及细胞增殖、凋亡、分化等多个方面。 结论 应用基因芯片技术可成功筛选转染FOXO1基因后A549细胞的差异表达基因。FOXO1在急性肺损伤中可能通过改变细胞的增殖、凋亡与分化等水平来影响疾病的进程。

    发表时间:2016-10-12 10:17 导出 下载 收藏 扫码
  • EGFR/Foxo3a/Snail1 通路在博来霉素肺纤维化小鼠中的作用机制探讨

    目的以表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼对博来霉素所致小鼠肺纤维化进行干预,探讨转录因子叉头盒 O3a(Foxo3a)的相关下游信号通路,阐明 Foxo3a 在肺纤维化中可能的作用机制。方法将 30 只 6 周龄 SPF 级 C57BL/6 小鼠(雌雄各半)随机平均分为 3 组:对照组(气管内滴入 0.9% 的氯化钠注射液)、博来霉素组(气管内滴入博来霉素 3 mg/kg)和吉非替尼组(气管内滴入博来霉素 3 mg/kg 后以吉非替尼 20 mg·kg–1·d–1灌胃)。14 d 后收集小鼠肺组织,左肺行 HE 及 Masson 染色,取右肺以逆转录–聚合酶链反应法与免疫印迹法分别检测 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)、Foxo3a、叉头盒 M1(FoxM1)、Snail1 mRNA 与蛋白表达水平。结果吉非替尼处理后,肺组织病理损伤及纤维化程度评分较博来霉素组明显降低(均 P<0.01),与博来霉素组比较,α-SMA、Snail1(均 P<0.01)、HMGB1(P<0.05)mRNA 表达水平下调,E-cadherin(P<0.01)、Foxo3a、FoxM1(均 P>0.05)mRNA 表达水平上调;α-SMA(P<0.05)、Snail1(P<0.01)、HMGB1 蛋白水平(P<0.05)以及 Foxo3a 蛋白磷酸化水平(P<0.01)表达下调,E-cadherin(P<0.05)、Foxo3a 及 FoxM1 蛋白表达上调(均 P>0.05)。结论Foxo3a 活性增加可下调 Snail1,使 α-SMA 表达降低、E-cadherin 表达升高,从而减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。

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  • 两种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对小鼠肺纤维化的干预作用比较

    目的 比较两种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂( EGFR-TKI) 吉非替尼与厄罗替尼对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用。方法 40 只雌性BALB/ c 小鼠分为对照组( NS 组) 、博莱霉素纤维化组( BLM组) 、吉非替尼组( GE 组) 和厄罗替尼组( ER 组) 。实验第1 d, BLM组、GE 组和ER 组小鼠经气管滴入博莱霉素致肺纤维化, NS 组气管内滴入生理盐水; 同时, GE 组及ER 组分别口服吉非替尼( 20 mg·kg- 1·d - 1 ) 和厄罗替尼( 25 mg·kg- 1· d- 1 ) , 余两组口服生理盐水。持续给药2 周后杀鼠取肺, 左肺石蜡包埋切片行HE 染色与Masson 染色, 免疫组化检测总EGFR 及磷酸化EGFR; 右肺匀浆检测羟脯氨酸含量。结果 吉非替尼与厄罗替尼均能明显减轻博莱霉素引起的肺结构破坏、胶原沉积, 降低磷酸化EGFR 表达及纤维化小鼠肺羟脯氨酸含量( P lt;0. 05) , 两者的上述作用无明显差异( P gt;0. 05) 。结论 EGFR-TKI 通过抑制EGFR 磷酸化, 有效减轻博莱霉素诱导的肺纤维化形成, 为肺纤维化的靶向治疗提供了新思路。

    发表时间:2016-08-30 11:53 导出 下载 收藏 扫码
  • NF-κB p65 基因在TNF-α诱导的肺泡上皮细胞氧化损伤中的作用

    目的 建立急性肺损伤肺泡上皮细胞炎症模型, 探讨NF-κB p65 基因在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法 以肿瘤坏死因子α( TNF-α, 10 ng/mL) 刺激A549 细胞, 运用RNA 干扰技术沉默核因子κB( NF-κB) p65 基因, 采用RT-PCR 及Western blot 法检测沉默效率, ELISA 法检测细胞培养上清中白细胞介素1β( IL-1β) 、IL-4、IL-6 等炎症因子浓度, 比色法检测细胞内丙二醛( MDA) 及超氧化物歧化酶( SOD) 浓度, MTT 法检测细胞存活率。结果 TNF-α刺激A549 细胞可在基因及蛋白水平上调NF-κB p65 的表达, 并增加NF-κB 蛋白的核转位; 同时细胞培养上清中IL-1β、IL-4、IL-6 的浓度升高, 细胞内MDA 增多, SOD 减少, 细胞存活率降低。预转染NF-κB p65 siRNA 可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65 表达, 降低TNF-α诱导的上述各炎症因子及MDA 浓度的增高, 减少SOD 的耗损, A549 细胞存活率升高( Plt;0.05) 。结论 NF-κB 能介导TNF-α触发的过度炎症反应和氧化应激, 导致细胞存活率明显降低; 沉默NF-κB p65 基因可有效下调炎症反应水平及其诱发的氧化应激, 减轻肺结构细胞的损伤。

    发表时间:2016-09-13 04:00 导出 下载 收藏 扫码
  • 脂多糖经不同给药方式致急性肺损伤小鼠模型的比较研究

    目的 比较脂多糖( LPS) 经三种不同给药方式复制急性肺损伤( ALI) 小鼠模型的病理损伤特征及炎症反应程度, 优化ALI 小鼠造模方法。方法 BLAB/ c 小鼠麻醉后分别采用气管内雾化( ITA 组) 、气管内滴入( ITI 组) 和腹腔注射( IPI 组) LPS( 5 mg/kg) 的方法复制ALI 小鼠模型, 同时用伊文斯蓝取代LPS 显示气管内雾化和滴入时药物的肺内分布。LPS 给药2 h 后处死小鼠, 分别取肺组织行干湿重比、HE 染色及病理评分,Western blot 检测肺组织IκB-α含量及IκB-α、NF-κB p65 磷酸化水平, qRT-PCR 检测肺组织TNF-α和IL-1βmRNA 转录强度。结果 ITA 组伊文斯蓝在小鼠各肺叶中分布较ITI 组更均匀。LPS 给药2 h 后ITA 组、ITI 组和IPI 组小鼠肺组织干湿重比和病理损伤评分均显著高于正常对照组( NC 组, P lt; 0. 01) , 其中ITA 组病理损伤评分最重( P lt;0. 05) 。Western blot 结果显示ITA 组小鼠肺组织IκB-α降解程度、IκB-α和NF-κB p65 磷酸化水平均显著高于ITI 组 ( P lt;0. 05) , 而ITI 组又显著高于IPI 组( P lt;0. 05) 。qRT-PCR 结果显示ITA 组小鼠肺组织TNF-α和 IL-1βmRNA 转录强度均显著高于ITI 组( P lt; 0. 05) , 而ITI 组又显著高于IPI 组( P lt; 0. 05) 。结论 气管内雾化LPS 造成的肺组织病理损伤和炎症反应更加广泛和严重, 且具有手术创伤小、操作方便等特点, 是复制急性肺损伤小鼠模型的优选方案

    发表时间:2016-09-13 03:51 导出 下载 收藏 扫码
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