• 1四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室(成都,610041);2深圳大学医学院生物化学与分子生物学教研室;
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目的  通过检测异染色质蛋白1α(HP1α)在DNA损伤后的磷酸化状况,介绍一种用磷酸化标签(phos-tag)试剂检测磷酸化蛋白质的新方法。 方法  取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎,分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞。对照组及实验组(6个损伤时间点)各取2个100 mm培养皿的细胞进行实验,实验组细胞用喜树碱进行DNA损伤;对照组用等量的二甲基亚砜处理。用掺入phos-tag的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转印,将膜用抗HP1α的抗体孵育,用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗,通过成像系统检测蛋白。 结果  实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带,与对照组相比DNA损伤后磷酸化HP1α含量一过性增多。 结论  HP1α被DNA损伤诱导为磷酸化状态,提示其可能在DNA修复过程中扮演重要角色。 Phos-tag 蛋白质印迹法可采用普通抗体检测磷酸化的蛋白,是一种简便易行的检测未知磷酸化蛋白质的新方法。

引用本文: 刘佳,周光前,尹献辉,李雪芹,王优雅,胡静仪,王子梅. 磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态. 华西医学, 2012, 27(6): 828-832. doi: 复制